流式细胞仪

发布日期:2022-12-20     点击数:

一、仪器主要参数

流式细胞仪型号:艾森NovoCyte 2040R,双激光(488nm,640nm), 488nm激光器配置3个检测通道:FITC(530nm/30)、PE (572nm/28)、PerCp (675nm/30);640nm激光器配置1个检测通道:APC(675nm/30)。仪器最大样品流速:120μL/min。

二、主要应用:

用于定性、定量分析细胞膜、细胞质和细胞核中的各种细胞成分;细胞的各种功能状态,如增殖、凋亡、分化、酶活性、细胞膜通透性、氧化还原状态、吞噬性等:

1、细胞表面标志检测:细胞免疫表型分析、表面蛋白分析等。

2、细胞内蛋白检测:细胞因子、细胞骨架分子和胞质酶类等

3、细胞内离子浓度检测:H+、Na+、K+、Ca2+等。

4、细胞核成分检测:细胞周期、DNA总量分析等。

5、细胞膜:流动性、膜电位、膜通透性等。

6、细胞功能:如细胞死活判定、pH值、增殖与凋亡、抗药性等。

7、基因表达:内源及外源基因表达,荧光报告基因的表达和转染效率判定。

三、样本制备

1、待测样品必须为单细胞悬液,测试前经筛网或细胞滤膜过滤。

2、保持样品细胞活力,尤其细胞表达蛋白(包括细胞内和细胞表面)分析,必须为新鲜制备的活细胞。

3、正确设立对照,包括阳性对照、阴性对照等。

四、使用流程

1、开机

轻按电源键启动仪器,电脑上打开NovoExpressTM,待仪器初始化完成,待软件状态栏显示“就绪”。

2、新建实验

①点击主菜单“文件”→“新建”新建实验”;

②可用以下多种方式新建实验样本或标本:

▲选择“实验管理”,右键点击“实验文件名.ncf”,在本实验文件下新建标本。右键点击“标本”,在选中的标本下新建样本。

▲如已有模板文件,点击主菜单“文件”→“新建”→“从模板新建”,将新建有相同模板的标本或样本。

▲点击主菜单“文件”→“保存”。

3、样品采集

①在“实验管理”面板,双击样本,使之成为当前样本;

②设置采集条件:样本使用参数、停止条件、流速;

③将样本管充分混匀,置于样本架。

④点击“采集”按钮。此时样本针会向下运动至样本管内,吸取一定体积的样本后收回。注意:样本管须放正,避免打针!

4、数据分析

①画图:根据需要选择图标做图,进行荧光通道参数选择与修改,图片缩放;

②设门:根据需要选择门类型,双击门的标签可以对门进行重命名;

③导出/导入模板

▲在“实验管理”面板右键点击标本或样本名称,选择“导出”→“做为模板导出”或者“导入”→“导入模板”

▲在标本或样本名称上按住鼠标左键,拖动到另一个标本或样本名称,可直接实现模板应用。

④导出/导入FCS文件:

▲在“实验管理”面板右键点击实验文件名称、标本或样本,选择“导出FCS文件”。

▲导入FSC文件:在“实验管理”面板右键点击实验文件名称、标本或样本,选择“导入FCS文件”。

5、关机

平衡废液,待电源键为绿色,即可轻按仪器前面板上的电源按钮,仪器将自动执行关机清洗流程。关机流程结束后,电源自动切断,指示灯熄灭,及时关闭电脑。

注意事项:

1、实验操作前须检查鞘液、废液、冲洗液和清洗液的水位;

2、样品上机前,须提前过滤处理单细胞悬液(常用滤网:40μm、70μm、100μm);

3、样品管位置摆放正确,避免样本针被打弯,推荐使用5 mL流式管上样;

4、拷贝数据,需提前将U盘格式化后再使用。

5、若仪器出现任何故障,及时联系工作人员。


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